ELISA: dekódování, metody

1. 6. 2019

S vývojem takových příbuzných oborů, jako je genetika, molekulární biologie, chemie, stejně jako růst technického pokroku, se moderní medicína může pochlubit inovativními metodami diagnostiky různých lidských nemocí. Vyznačují se vysokou přesností výsledků a bezpečností výkonu. Jedním z těchto způsobů identifikace zdravotních problémů je enzymová imunotest. Získala širokou popularitu v posledních deseti letech a získala si pověst vysoce účinného, ​​spolehlivého a bezpečného pacienta pro detekci onemocnění ještě předtím, než se objeví vnější příznaky. Jasně vysvětlíme, jaký je tento typ diagnózy, jaký je její princip činnosti, poznamenat výhody, orientovat ji v nákladech na tuto analýzu.

Enzymová imunoanalýza

Reakce organismu na patogenní flóru

Abychom porozuměli tomu, že díky enzymatickému imunoanalýze diagnostikují laboratorní technici různé nemoci, je třeba porozumět fyziologickému procesu, který se vyskytuje v těle během infekce. Když patogen vstupuje do krevního řečiště, lidského imunitního systému demonstruje ochrannou reakci ve formě uvolňování určitých látek - protilátek. Oni se váží k buňce a analyzují, zda je součástí těla nebo je integrována zvenčí. Pokud imunitního systému že buňka je cizí, pak se začne zvyšovat množství protilátek za účelem boje proti patogenním mikroorganismům.

Protilátky jsou různé typy, mají své vlastní vlastnosti. Některé látky se objevují přímo v období infekce, jiné zůstávají po celý život v lidském těle a díky nim se vyvinou silná imunita vůči určitému onemocnění. Proteinové struktury jsou rozděleny na tyto druhy: A, D, E, M, G. V medicíně se protilátky nazývají imunoglobuliny. Proto je obvyklé označovat výkonnost těchto látek latinským písmem Ig.

ELISA: normální

Imunoanalýza analýza (ELISA) Vychází z údajů o lékařských znalostech. Pomocí speciálních antigenů v laboratoři můžete zjistit přítomnost nebo nepřítomnost určitých protilátek v biologickém materiálu. Podle výsledků této analýzy doktor může provést diagnózu a určit nejen přítomnost patologie, ale i trvání jejího původu, aby zjistila úroveň rizika pro pacienta. V enzýmovém imunoanalýze se častěji vyšetřuje přítomnost protilátek skupin M a G.

Co je metoda ELISA?

Imunoanalýza enzymů ve skutečnosti není inovace moderní společnosti. Byl vynalezen v 80. letech. Ale takové studie vyžadovaly těžkopádné drahé vybavení. Proto byla tato metoda používána pouze ve speciálně vybavených vědeckých laboratořích: byla použita pro psaní buněk a tkání. Ale v té době nebyla v diagnostické medicíně široce používána, bylo technicky obtížné a nesmírně nákladné ji používat. Pouze s vývojem technologie a vynálezem biopolymerních materiálů se zlepšila metoda ELISA. Následně se tato metoda stala populární a získala důvěru v lékařské kruhy.

Jak již bylo uvedeno výše, tato metoda zahrnuje detekci jistých skupin imunoglobulinů v biomatu - krev, plodová tekutina, sklovité tělo nebo cerebrospinální tekutina.

Existují studie bez použití antigenu na povrchu a enzymem spojeného imunosorbentního testu, který zahrnuje provedení reakce ve zvláštních jamkách. Posledně jmenovaná metoda má větší citlivost a spolehlivost, a proto je analyzována v lékařských laboratořích pro detekci lidských nemocí.

Imunoanalýza fáze

V závislosti na zamýšleném onemocnění enzymová imunoanalýza používá potřebný antigen, který během chemické reakce v přítomnosti infekce bude kontaktovat patogenní flóru. Tento proces se nazývá provádění imunitní odpovědi.

Poté vizuálně určte výsledek studie a proveďte enzymatickou fázi ELISA. Jedná se o barvení materiálu pomocí speciálních činidel. V této studii se používají enzymy, jako je alkalická fosfatáza, peroxidáza a avidin. V závislosti na výsledné barvě v procesu provádění chemických reakcí a určení výsledku enzymového imunoanalýzy.

Co je to kolorimetrie?

Analýza enzymatické fáze diagnostiky se provádí metodou, která má název "kolorimetrie". Faktem je, že nejen barva materiálu poskytuje informace o infekci, ale také hustotu barvy vyplývající z chemických reakcí. Tento indikátor určuje koncentraci patogenu. Pokud se ruční metoda diagnostiky používá starým způsobem, je vytvořen speciální kalibrační graf pro určení indikátorů.

V moderních laboratořích se ruční metoda dnes používá jen zřídka. Pro analýzu metody ELISA se používá speciální zařízení - kolorimetr, ve kterém jsou nastaveny pouze parametry studie, a pak přístroj automaticky provede veškerou práci včetně vykreslování.

ELISA analýza krevního séra

Metody ELISA

Existují přímé a nepřímé metody enzymového imunoanalýzy. První typ trvá méně času, protože má pouze 3 etapy implementace. Nejprve se ke antigenům zkoumaného materiálu přidávají specifické protilátky, které se umístí do zvláštních jamek. Poté odstraňte jejich nadbytečné množství a proveďte enzymatickou fázi analýzy a získáte tak výsledek.

Nepřímá metoda se používá mnohem častěji, protože má vyšší citlivost ve srovnání s přímou metodou diagnostiky. Při jeho provádění je použito dvojího výzkumu. Konkrétně - nejprve je antigen spojen s neznačenou protilátkou a poté s označeným. Tento proces trvá více času, ale výsledek je nejpřesnější.

Sady reagencií

Soupravy pro imunotest jsou vyráběny různými výrobci, v různých úrovních trim. V Rusku je uznávanou společností Union Biomedical. Tento výrobce vyrábí sady činidel pro studium metodou ELISA téměř všech běžných infekcí v našich zeměpisných šířkách, které lze analyzovat tímto způsobem. Kromě samotných činidel obsahují soupravy dodatečné materiály, které zajišťují bezpečnost, pohodlí a rychlost analýzy. Kromě toho jsou chemické látky natřeny v různých barvách, což snižuje pravděpodobnost chyb při výběru laboratoře reagencií.

Immunoassay sady

Chemicko-biologické soupravy se liší relativní dostupností, což přímo ovlivňuje distribuci a dostupnost enzymového imunoanalýzy pro populaci.

Výhody diagnostické metody

Enzymová imunoanalýza nepochybně má několik výhod ve srovnání s jinými diagnostickými metodami:

  1. S jeho pomocí lze určit i malou přítomnost patogenních organismů, což naznačuje vysokou citlivost testu.
  2. Možnost detekce onemocnění v nejranějších stádiích, což významně zvyšuje šanci na úspěšné zotavení.
  3. Jednoduchost a pohodlí při užití biologického materiálu. Tato analýza se provádí jak v soukromých laboratořích, tak na veřejnosti. Pokud je to nutné, může zdravotní sestra vzít materiál od pacienta doma.
  4. Pro analýzu je zapotřebí velmi malé množství biomateriálu.
  5. Rychlé výsledky. Moderní lékařská zařízení vám umožní provádět analýzu během jednoho dne.
  6. Schopnost detekovat skryté asymptomatické formy infekce.
  7. Studie dostupnosti.
  8. Je-li to nutné, lze pomocí této metody provést hromadné průzkumy.
  9. Existuje možnost sledování průběhu onemocnění a účinnosti předepsané léčby, protože je možné provést analýzu ELISA, která je pro pacienta absolutně bezpečná.
  10. Automatizace fází analýzy, která eliminuje lidský faktor a zvyšuje spolehlivost výsledků.
  11. Reagencie pro provádění IFA jsou uloženy dost dlouho - asi rok.
  12. Analýza je možná s kolísáním teploty okolí.

Imunoglobuliny skupiny M

Výsledek enzýmové imunoanalýzy

Protilátky skupiny M jsou produkovány imunitním systémem bezprostředně po detekci cizího antigenu. V důsledku toho, jestliže enzymatický imunotest byl dokončen detekcí takových látek v biomateriálu, znamená to akutní stadium onemocnění, primární infekci. Imunoglobuliny skupiny M mohou být v těle po dobu až jednoho měsíce v závislosti na typu infekce. Pak jejich počet klesá až do úplného zániku.

Imunoglobuliny skupiny G

Nahrazená imunoglobulinovou skupinou M se objevila struktura proteinu formy G. Tyto látky produkují silnou, ve většině případů celoživotní imunitu vůči nemoci. Stanovení struktury proteinu IgG ve studovaném materiálu ukazuje, že organismus se předtím setkal s patogenem a má ochrannou reakci proti reinfekci.

Indikace pro diagnózu

Imunoanalýza enzymů se používá k určení různých infekčních onemocnění, hormonálních stavů a ​​alergických testů. Konkrétně:

  • určit hladinu hormonů štítné žlázy;
  • indikátory reprodukčního hormonálního panelu;
  • oncomarkery;
  • detekovat infekční agens, jako je cytomegalovirus, hepatitida, toxoplasma, rubeola, spalničky, tuberkulóza, chlamydia, syfilis, mykoplazma, ureplasma, candida, giardia a dokonce HIV;
  • jsou diagnostikovány autoimunitní onemocnění. Včetně často používaných pro studium hormonů štítné žlázy enzymem spojených imunosorbentů: TSH, TG, T3 a T4.

Navíc k diagnostickým účelům se metoda enzymatické imunoanalýzy používá v lékařských výzkumných činnostech.

Jak se materiál odebírá?

Ve většině případů se doporučuje provést analýzu žilní krve. Po zpracování a přípravě materiálu pro studii se provede imunotest. krevní sérum nebo plazmy.

Studie hormonálního panelu vyžaduje zvláštní pozornost, protože v tomto případě je nesmírně důležité vzít v úvahu vlastnosti příjmu materiálu. Například diagnóza většiny ženských hormonů reprodukčního systému vyžaduje, aby byla v určitých dnech menstruačního cyklu odebrána venózní krev. Řada dalších hormonů je ovlivněna vnějšími faktory: sezónností, denním stavem, psychickým stavem pacienta a mnohem více. Bez zohlednění konkrétních faktorů můžete získat falešný výsledek, který povede k exacerbaci onemocnění nebo nesprávně předepsané léčbě.

Imunosorbentní test s enzymovou vazbou (ELISA)

V některých, častěji komplikovanějších případech může být potřebná analýza mozkomíšního moku, sklivce nebo plodové tekutiny těhotné ženy. Postupy pro shromažďování těchto biologických materiálů nesou určité riziko, mají kontraindikace a dobu zotavení. Proto by mělo být provedeno pouze podle svědectví lékaře a pod jeho odborným dohledem takový enzymový imunotest. Dekódování v tomto případě vyžaduje zvláštní lékařské znalosti a může trvat nějaký čas.

Příprava na analýzu

Enzymová imunoanalýza by měla být provedena, dodržovat všechna doporučení, protože vnější výsledky ovlivňují výsledky studie. Například je důležité brát venózní krev na prázdný žaludek ráno (až 11 hodin). 2 týdny před zamýšleným sběrem materiálu musíte přestat užívat jakékoli léky, zejména hormonální. Několik dní před zahájením studie by se mělo zdržet používání alkoholu a mastných potravin, stejně jako eliminovat fyzickou námahu, zážitky a stres.

Dekódování výsledků

Dekódování výsledků enzymového imunoanalýzy vyžaduje zvláštní znalost zvláštností proteinových struktur (protilátek), které byly popsány výše (IgG a IgM). V souladu s těmito údaji jsou analyzovány ukazatele výzkumu. Tabulka popisuje možnosti, které lze získat během analýzy:

ELISA: transkript
Imunoglobuliny M Imunoglobuliny G Odhadovaná dešifrování
negativně negativně Tělo se s touto infekcí nikdy nesetkalo. Neexistuje žádný patogen nebo protilátky proti němu.
negativně pozitivně Tělo vyvinulo silnou imunitu vůči infekci.
pozitivně negativně Akutní infekce.
pozitivně pozitivně Nejpravděpodobnější primární infekce, ale vyžadují další diagnostické studie.

Při analýze předložené tabulky lze usoudit, že ve většině případů budou nutné další studie k potvrzení diagnózy. Nemůže poskytnout jednoznačnou odpověď pouze na enzymový imunoanalýza. Norma v tomto případě nemá jasné hranice: zjištěné proteiny skupiny G pouze ukazují, že organismus byl dříve podroben infekci definovaným patogenem. Stejný výsledek však může naznačovat přítomnost akutní fáze - pro správnou diagnózu je důležité porovnat mnoho faktorů a indikátorů.

Rizikové faktory

Test ELISA je 90% přesný. Přesto existují rizikové faktory, které ovlivňují zkreslení diagnostického výsledku: porucha zařízení, nesprávný sběr materiálu, jeho skladování a transport a zanedbání dalších vnějších faktorů.

Metody enzymatického imunoanalýzy

Nedoporučuje se provádět diagnostiku po krevní transfuzi, hemolýze, chirurgii, biopsii nebo punkci biologického materiálu - to může také ovlivnit výsledky indikátorů.

Náklady na analýzu

Náklady na diagnostickou studii mají velký rozsah a závisí na typu analýzy a stanoveném antigenu, protože na základě těchto faktorů se vypočítají náklady na soupravy činidel a stanoví se složitost analýzy. Ve většině případů je však ELISA k dispozici mnoha pacientům. Jeho cena se pohybuje od 300 p. do 2000 str.

ELISA je cenově dostupná, rychlá a vysoce účinná metoda pro diagnostiku rozsáhlého seznamu onemocnění. Avšak pouze kvalifikovaný lékař má právo se zabývat interpretací výsledků a diagnóz.